Полимеразная реакция (ПЦР) – что это такое
За открытие самого метода обнаружения вирусов с помощью полимеразной цепной реакции Кэри Муллис получил Нобелевскую премию в 1993 году. Сейчас эта методика успешно применяется по всему миру, хоть и считается новаторской.
Идея заключается в том, что биологический материал: кровь, мокроту, реже — содержимое желудка, помещают в специальный прибор под названием амплификатор. Здесь пробирку нагревают и охлаждают множество раз, строго соблюдая температурный режим.
Важно понимать, что туберкулез – болезнь очень коварная по своей природе. Инфицированный может не догадываться о своем статусе на протяжении долгого времени. Возбудитель находится в организме и никак себя не проявляет.
Схема анализа ПЦР.
Важно! Анализ крови ПЦР на туберкулез сможет выявить наличие возбудителя в организме с большой точностью, но нужно не забывать о необходимости пройти также реакцию Манту и флюорографию для получения полной картины.
Недостатки ПЦР
Анализ ПЦР имеет и свои недостатки, из-за которых его рекомендуют использовать только в совокупности с другими методами, чтобы быть уверенным в результате:
Когда стоит пойти на ПЦР?
Внимание! Не занимайтесь самолечением – обратитесь к врачу! Чем раньше туберкулез будет диагностирован, тем проще и легче пройдет лечение.
Преимущества и недостатки анализа
Диагностика туберкулеза данным методом – распространенная процедура, она имеет ряд преимуществ:
Подготовка к процедуре
Во избежание получения ложного или не информативного результата рекомендовано придерживаться следующих правил:
Повлиять на точность результата могут некоторые лекарственные препараты, особенно антибиотики и гепарин. По этой причине за 3 дня до проведения процедуры следует исключить их применение.
Расшифровка результатов
Срок проведения исследования на ПЦР при туберкулезе составляет 6-7 часов.
Может быть 2 варианта ответа:
Методика исследования
ПЦР-диагностика туберкулеза потребует предварительного забора материала. В качестве него подойдут следующие биологические жидкости:
кровь;- моча;
- кал;
- мокрота;
- соскоб с любых органов;
- выделения половых органов;
- спинномозговая жидкость.
кровь;Что касается крови и мочи пациента, то, несмотря на достаточно высокую частоту использования именно таких материалов, эффективность и актуальность выявления микобактерии туберкулеза данным способом является сомнительной.
Как проводится сама ПЦР-диагностика
В амплификаторе находятся все необходимые ферменты для того, чтобы обеспечить возможность удвоения молекул ДНК. В дальнейшем оценивается их количество. Таким методом устанавливается факт наличия или отсутствия возбудителя туберкулеза.
При этом доктор пользуется следующей системой оценки:
В результате доктор получает возможность достаточно легко определить наличие или отсутствие возбудителя заболевания в исследуемом материале.
К кому обратиться за проведением анализа?
В настоящее время есть сразу несколько специалистов, которые могут назначать подобный вариант исследования.
Основными среди них являются следующие врачи:
- пульмонолог;
- фтизиатр;
- терапевт;
- педиатр.
Несмотря на то, что назначить ПЦР для диагностики туберкулеза может каждый из этих специалистов, однако оценить результаты такого анализа и установить окончательный диагноз может только врач-фтизиатр.
Помимо этого, он назначит необходимый курс лечения, установит, где именно он должен проходить (на дому или в специализированном стационаре), а также предоставит пациенту все необходимые рекомендации по изменению образа жизни.
Что такое ПЦР?
ПЦР на туберкулез – это полимерный цепной процесс, при котором проходит диагностика и выявление вирусных возбудителей способом генной инженерии. Методика используется в иммунологических, микробиологических, вирусологических и биохимических лабораториях.
Универсальный метод помогает докторам при диагностике и выявляет инфекционный процесс даже после первых часов заражения, задолго до появления симптомов. Исследование возможно даже при маленьком количестве биоматериала.
Что нужно для проведения анализа?
- Несколько отрезков ДНК (праймеров), с них начинается биологический синтез;
- Нуклеотидные соединения, основа молекулы ДНК или же РНК;
- Фермент полимераза, которая ускоряет анализ ПЦР.
В чём основа метода?
Сначала из биоматериала от заразившегося человека выделяется сегмент ДНК, при помощи генно-молекулярных способов биосинтеза дальше определяется тип микроорганизмов, которому принадлежит биофрагмент.
При проведении анализа крови ПЦР на туберкулез в пробирке искусственны путем создается синтез рибонуклеиновых кислот туберкулезной микобактерии.
Обязательно ли делать ПЦР при туберкулезе?
ПЦР на туберкулез делается исключительно тогда, когда не имеется возможности сделать другой инструментальный анализ либо в сложных для диагностики обстоятельствах.
Видео
Видео – ранняя диагностика
Что такое ПЦР диагностика
В основе реакции лежит возможность в искусственных условиях (в пробирке) создать синтез молекул нуклеиновых кислот возбудителя инфекции.
Что необходимо для проведения ПЦР?
Этапы ПЦР диагностики
Как проводится молекулярная диагностика методом ПЦР? Процедура несложная и занимает короткий промежуток времени с учётом сбора материала.
В результате всего 25–30 таких циклов получают нужное количество копий ДНК микроорганизмов, которые легко распознать.
Преимущества диагностики туберкулёза с помощью ПЦР
Это исследование хоть и новое, но хорошо себя зарекомендовало, особенно в спорных случаях, когда диагноз поставить невозможно по ряду причин.
Благодаря ПЦР намного легче обнаружить в исследуемом материале ДНК возбудителя туберкулёза.
Преимущества ПЦР диагностики в следующем.
После всего прочитанного ПЦР кажется практически идеальным методом диагностики, который должны делать всем с подозрением на туберкулёз. Но и здесь есть свои минусы, их необходимо учитывать.
Показания для выявления туберкулёза с помощью ПЦР анализа
ПЦР диагностика туберкулёза проводится чаще всего в спорных случаях. Когда врачи направляют на это исследование?
Достоинства ПЦР
Какие именно преимущества дает процедура анализа ПЦР на туберкулез? Есть несколько основных причин, по которым этот метод широко используется в настоящее время:
- Очень высокая чувствительность – при наличии хотя бы одного фрагмента генетического материала возбудителя болезни, после многократной репликации в итоговой картине не увидеть его будет невозможно.
- Высокая специфичность позволяет исключить многие другие близкие по симптоматике заболевания.
- Оперативность – результат можно будет узнать уже через 5 часов после забора материала, а при некоторых вариантах проведения процедуры – через час.
- Универсальность – в большинстве случаев один и тот же образец можно проверить на наличие не только туберкулез, но и части других инфекций, например, ВИЧ или герпес. В таком случае получившийся после репликации материал просто сверят с большим количеством возбудителей.
- Достаточно демократичная стоимость – благодаря универсальности метода лаборатории не слишком завышают цену на этот анализ в отличие от многих других методов исследования.
Что нужно знать о процедуре ПЦР?
Трудность состоит в том, что при отсутствии кашля добиться отхождения мокроты весьма сложно, что сводит на нет главное преимущество метода ПЦР – возможность определить наличие болезни тогда, когда симптомов еще нет.
Существуют ли анализы вместо Манту?
Такие методики имеются. Вместо реакции Манту используются следующие способы диагностирования туберкулеза:
- Т-СПОТ;
- Квантифероновый тест;
- Общий анализ крови;
- ИФА;
- ПЦР.
Целесообразность их применения обусловлена стремлением добиться 100 % выявления инфицированных пациентов.
ПЦР-анализы
Один из наиболее достоверных тестов, используемых для диагностики туберкулеза – ПЦР вместо Манту.
Полимеразная цепная реакция признана самым чувствительным методом выявления туберкулезной инфекции. Ее применение назначается, если имеется подозрение на ложноположительные результаты Манту или проявляется сомнительная реакция на пробу.
Подготовка к сдаче
Исключение вероятности искажения результатов обследования обеспечивает соблюдение стерильности при заборе крови.
Пациента перед сдачей анализа обязательно осматривает врач, так как показания будут искажены, если в организме присутствует любая инфекция или воспалительный процесс.
Виды ПЦР
В отличие от предыдущих методов, ПЦР на туберкулез вместо Манту предполагает не только исследование крови. Не менее важными пробами при этом являются пробы мокроты, слюны и мочи.
Кровь
Определение типа патогенной молекулы ДНК позволяет выявить заболевание, что становится предпосылкой для выбора эффективного курса лечения.
Среди неоспоримых плюсов метода:
Кроме того, что тест дает возможность определить присутствие в организме пациента микобактерий туберкулеза, он с точностью определяет их концентрацию.
Существенным недостатком метода является способность выявлять наличие не только живых, но и погибших патогенных бактерий, что затрудняет определение стадии клинического развития заболевания.
Мокрота
Анализ мокроты отличается информативной точностью. Достоверность выявления туберкулезной палочки в организме достаточно высока.
Для пробы берется мокрота (без слюны), выделяемая при кашле из легких.
Наличие в тесте большого количества белка указывает на присутствие туберкулезной инфекции.
Исследование мокроты позволяет определить стадию заболевания. При запущенной форме болезни (распаде легочной ткани) в образце обнаруживаются бациллы туберкулеза, холестерин и соли кальция.
Диагностика заболевания проводится методом посева образцов мокроты на питательную среду.
Слюна
В ходе исследования слюны берется мазок для определения наличия микроорганизмов, имеющих одинаковую природу с бактериями туберкулезной инфекции.
Недостаток метода: развитие культуры мазка происходит в течение достаточно длительного периода (3-6 недель).
Ценность результатов высева культуры слюны заключается в способности подтвердить диагноз, выставленный с помощью других проб.
ПЦР мочи на туберкулез целесообразно использовать для выявления внелегочных форм болезни с локализацией в почках или мочеполовых путях. Наибольшая достоверность теста достигается при использовании диагностического способа – микобактериурии.
Для подтверждения затем проводится бактериоскопия и посев биоматериала на специальную среду.
Окончательный диагноз на присутствие бацилл Коха выставляется после комплексного обследования и применения различных диагностических методик.
ПЦР-анализы отличаются высокой точностью, но их проведение требует строгое соблюдение технологических требований.
Общая информация
Следует отметить, что анализ на туберкулез должен осуществляться при соблюдении дополнительных норм и учете некоторых нюансов:
Недостатки ПЦР
Рассказывая о преимуществах ПЦР при идентификации поражения легочной системы, нельзя не отметить недостатки представленной методики, в частности, то, что:
Другие методы диагностики и всемирный день борьбы с туберкулезом указывают на то, что микобактерии правильнее всего идентифицировать, когда осуществляется томография, проба Манту и другие мероприятия у детей и людей постарше.
Что такое анализ мочи методом ПЦР?
Тут важна точность, поэтому работники лаборатории должны иметь соответствующие знания и навыки.
Кроме туберкулеза с помощью ПЦР диагностируют и другие инфекционные болезни (гепатит, ИППП, ВИЧ, кандидоз, боррелиоз и др.).
Противопоказания к методу
Какие-либо противопоказания отсутствуют. Делать анализ разрешено:
- у детей;
- при ОРЗ, ОРВИ, ГРИПпе, кори и пр.;
- во время аллергий и др.
Нецелесообразно проводить возрастной категории от 0 до 3-ех лет из-за получения недостоверных результатов.
Данный метод обследования выбирают чаще других из-за отсутствия в нем противопоказаний и высокого процента получения достоверных результатов.
Недостатки
- высокая цена (но она колеблется в зависимости от курса доллара и других факторов);
- бывают ложные результаты (около 10%).
Ложные ответы появляются по разным причинам.
Все вышеперечисленное – повод использовать дополнительные диагностические мероприятия.
Как проводится этот анализ?
Проведение ПЦР при туберкулезе проводится в несколько этапов. Рассмотрим каждый детально.
Оборудование, с помощью которого проводится анализ дорогостоящее и присутствует не везде.
Стоимость анализа в разных центрах
Ниже можно ознакомиться с информацией о том, какие приблизительные цены на ПЦР мочи в медицинских лабораториях. Для сравнения представляем три популярных учреждения.
| Наименование медицинского центра | Адрес | Стоимость анализа |
| Инвитро | г. Москва, Алексеевский, Кулаков переулок, 13 | 365 рублей |
| Медлайн-сервис | г. Москва, Пятницкое шоссе, д. 41 | 390 рублей |
| Центр Роса | г. Москва, улица Гвоздева, д. 5 | 564 рубля |
Из вышеописанного можно сделать вывод, что стоимость на анализ не превышает 400 рублей. Такая сумма не может остановить больного при необходимости подтверждения диагноза.
Имейте в виду! Иногда в клиниках присутствуют акции и скидки. Следить за ними можно на сайтах лабораторий, узнать в телефонном режиме или не ресепшене в самом офисе.
Виды лучевых способов нахождения болезни
- Флюорография – способ диагностирования заболевания, знакомый каждому жителю СНГ. При помощи рентгеновых лучей исследуются легкие и внутригрудные лимфатические узлы.
- Рентгенография грудной клетки – похожий на флюорографию, но более качественный метод обнаружения инфекции. Снимок получается подробнее и в двух проекциях, но эта процедура примерно в шесть раз дороже. Обычно ей пользуются после того, как возникли серьезные подозрения на заболевание.
- Компьютерная томография осуществляется как дополнительная диагностика, применяемая также после серьезных оснований на наличие инфекции.
К хирургическим способам диагностирования относят эндоскопию бронхов, а также медиастиноскопию и торакокоскопию.
Первый метод заключается в исследовании бронхиального дерева легких при помощи «зонда» в этот орган. Остальные два способа дают возможность изучить плевральную часть легкого при помощи прокола грудной клетки.
Все три метода являются серьезным хирургическим вмешательством и применяются чаще всего в процессе прогрессирования заболевания.
К лабораторным исследованиям относят:
- Анализ мокроты на туберкулезную палочку.
- Микроскопические исследования.
- ПЦР диагностика туберкулеза
